V drami Macbeth ima Lady Macbeth ključno vlogo pri smrti kralja Duncana. Ona je tista, ki prepriča Macbetha, da ubije kralja, in mu pomaga načrtovati in izvesti dejanje.
Potem ko Macbeth izrazi svoje dvome in strahove glede umora kralja, ga Lady Macbeth graja, ker je strahopetec, in ga osramoti, da je zagrešil zločin. Poudarja, da je že imel idejo, da bi ubil Duncana in da okleva le zaradi svoje "šibke narave". Prav tako ga spomni na njegovo ambicijo, da postane kralj, in mu pove, da mora biti neusmiljen, če želi doseči svoje cilje.
Odločnost in manipulacija Lady Macbeth sčasoma prepričata Macbetha, da pristane na njen načrt. Predstavi podrobnosti umora, vključno s tem, kako in kdaj naj bi bil storjen. Macbethu tudi reče, naj pusti krvava bodala ob Duncanovem telesu, da bo krivda padla na kraljeve stražarje.
Ko je storjen umor, je Lady Macbeth sprva prepričana, da ga bodo lahko prikrili. Vendar kmalu začne kazati znake krivde in norosti. Postane obsedena s krvjo na rokah in ne more spati. Prav tako začne imeti vizije duha Duncana, ki jo obtoži umora.
Krivda Lady Macbeth sčasoma postane prevelika zanjo. Umre v četrtem dejanju predstave in njena smrt je prelomnica za Macbetha. Postane še bolj neusmiljen in tiranski ter sčasoma izgubi razum.
Vloga lady Macbeth pri smrti kralja Duncana je pomembna, ker poudarja moč ambicij in nevarnosti, če dopustimo, da želje posameznika premagajo njihova moralna načela. Je zapleten in tragičen lik, ki ga na koncu uničita lastna ambicija in krivda.