Kirby-Bauerjeva tehnika je standardna mikrobiološka metoda, ki se uporablja za določanje občutljivosti bakterij na protimikrobna sredstva. Vključuje merjenje območja inhibicije bakterijske rasti okoli diskov, impregniranih z antibiotiki, nameščenih na ploščo z agarjem, inokulirano s testnim organizmom. Tukaj so splošni koraki Kirby-Bauerjeve tehnike:
1. Priprava inokuluma :
- Dobimo čisto kulturo testnega bakterijskega seva in jo gojimo v ustreznem gojišču za gojenje, da dosežemo logaritemsko rastno fazo (motnost).
- Bakterijska suspenzija je standardizirana na določeno motnost, ki je običajno enakovredna 0,5 McFarlandovemu standardu motnosti, da se zagotovi dosledna gostota inokuluma.
2. Inokulacija plošče z agarjem :
- Za preskus se uporabljajo sterilne agarske plošče, ki vsebujejo agar Mueller-Hinton ali drugo ustrezno gojišče z agarjem.
- Standardizirani inokulum s sterilno vatirano palčko enakomerno porazdelite po površini plošče z agarjem, da ustvarite sotočno trato rasti bakterij.
- Inokulirano ploščo pustimo sušiti nekaj minut, da absorbira odvečno vlago.
3. Uporaba Antibiotičnih diskov :
- Sterilne diske z antibiotiki, ki vsebujejo specifične koncentracije protimikrobnih sredstev, položite na površino plošče z agarjem v enakomerno razporejenih intervalih z uporabo sterilnih klešč ali razpršilnika diskov.
- Diske nežno stisnemo, da zagotovimo dober stik s površino agarja, ne da bi pri tem poškodovali diske.
4. Inkubacija :
- Inokulirana plošča z diski z antibiotiki se inkubira pri ustrezni temperaturi (običajno 35-37 °C) za določen čas (običajno 16-24 ur), da se omogoči rast bakterij in difuzija protimikrobnih sredstev.
5. Merjenje inhibicijskih območij :
- Po inkubaciji se plošče pregledajo glede prisotnosti inhibicijskih območij okoli diskov z antibiotiki.
- Z ravnilom ali digitalnim pomično merilom se izmeri premer vsake cone inhibicije v milimetrih.
- Premer cone kaže na občutljivost testnega organizma za določen antibiotik.
6. Interpretacija rezultatov :
- Izmerjeni premeri con se primerjajo s standardiziranimi tabelami ali smernicami, kot so tiste, ki jih je zagotovil Inštitut za klinične in laboratorijske standarde (CLSI), da se določi občutljivost ali odpornost testnega organizma na testirana protimikrobna sredstva.
- Organizmi so kategorizirani kot dovzetni, srednje odporni ali odporni na podlagi velikosti inhibicijskih območij in uveljavljenih meril za razlago.
7. Nadzor kakovosti :
- Za zagotovitev točnosti in zanesljivosti Kirby-Bauerjeve tehnike so sevi za nadzor kakovosti z znanimi vzorci občutljivosti vključeni v vsako serijo testiranja za spremljanje učinkovitosti metode in uporabljenih reagentov.
Pomembno je, da sledite standardiziranim postopkom in razlagate rezultate v skladu z uveljavljenimi smernicami, da pridobite zanesljive in klinično pomembne informacije iz Kirby-Bauerjevega testiranja občutljivosti na antibiotike.